外泌体提取

 

外泌体的提取方法有多种:包括传统的差速离心、密度梯度离心,以及后来发展的超滤法、聚合物沉淀法、免疫分离、隔离筛选法、体积排阻色谱法等。这些方法各有利弊。

 

 

服务内容

 

以琳生物综合各个方法的利弊,在现有试剂盒基础上进行优化,优化的外泌体分离试剂盒可以安全、快速获得高纯度和高产量的外泌体。

 

 

外泌体分离技术 耗时短 操作简便 外泌体产量 外泌体纯度 外泌体完整性
差速离心法

 

   
密度梯度离心法

 

 

 
超滤法

 
聚合物沉淀法

 
以琳生物试剂盒

 

样本来源

 

外泌体经细胞分泌后存在于体液或者血液中,故检测外泌体的样本一般为血液(全血、血浆)、体液(尿液、唾液、脑脊液、羊水、唾液等)、细胞上清液。

 

 

样本量

 

血清:样本量>5ml(全血10ml)。血浆:样本量>5ml(全血10ml)。体液:样本量>20ml。细胞培养上清液:样本量>20ml。

 

 

样本保存及运送

 

含外泌体的样本应低温保存;短时间(一般1周以内)可放4℃,长时间可放-20℃或者-80℃,并避免反复冻融。

 

外泌体鉴定

 

据国际细胞外囊泡学会(ISEV)在2014年的提议,外泌体鉴定分为三个层面:透射电镜(transmission electron microscope,TEM)、Nanosight粒径、蛋白标志物。

 

 

服务内容

 

以琳生物技术团队拥有丰富的外泌体鉴定经验,可提供外泌体透射电镜鉴定结果、精准的外泌体粒径分析、外泌体表面标志物表达鉴定。
 

TEM鉴定外泌体大小、形态

透射电镜分辨率为0.1~0.2nm,适合外泌体双层囊膜超微结构观察,可观测样本中是否存在外泌体样结构(通常为茶托型或一侧凹陷的半球形),同时可测量外泌体大小。

外泌体Nanosight粒径分析

 

 

示例:NTA分析人尿液样本

 

A:稀释1000倍尿液中颗粒大小; B:NTA跟踪描述纳米粒子的分布;C:尿液中颗粒(0-300 nm)的浓度。

 

外泌体标志物测定

外泌体表面存在特异性标志物分子,如CD9、CD81、CD63等。以琳生物可以提供Western blot和流式细胞术的鉴定结果。

Western blot检测CD63表达

 


流式细胞术分析外泌体表面CD63

 


 

 

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